细菌蛋白提取试剂盒

产品货号：

HR0053

中文名称：

细菌蛋白提取试剂盒

英文名称：

Bacterial protein extraction kit

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

简要说明：

本试剂盒可以从各种菌体中提取总蛋白，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

产品特点：

使用方便：不需昂贵设备。
可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用：

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳等下游蛋白研究实验。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用百奥莱博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用蛋白脱盐柱脱盐处理。

产品组成：

组分	50T	100T
细菌蛋白提取液A	25mL	50mL
细菌蛋白稳定剂B	250μL	500μL
蛋白酶抑制剂混合物C	100μL	200μL
磷酸酶抑制剂混合物D	100μL	200μL

保存：2～8℃，稳定剂、蛋白酶抑制剂置于-20℃，有效期1年。

保存事项：

蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完。

用户自备：

仪器准备：离心机、振荡器、涡旋混匀器、超声细胞破碎仪、移液器、冰箱。
试剂准备：1×PBS缓冲液(pH7.4，10mM)、蛋白定量试剂盒。
耗材准备：离心管、吸头、一次性手套。

操作提示：

预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。

使用方法：

裂解液的准备：根据所需要提取的样本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂混合物和5μL蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。
- 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
- 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
在4℃，10000×g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
按每50～100mg湿重菌体样本加入500μL裂解液，吹打混匀，2～8℃振荡20～30分钟。
- 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
- 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
在150～300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
- 此步可以选做，没有超声条件的话可以不超声，延长上步骤振荡时间即可，至菌体充分裂解。
- 超声时间尽量短，提取液变清即可，一般不超过20分钟。
- 如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率过大，需要降低功率。
- 避免产生泡沫。
在4℃，12000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。
即得到细菌总蛋白样品。
将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。
- 建议用BCA法进行蛋白定量。
- 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题：

蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长细菌蛋白提取液A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解，最好进行超声处理。
用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为细菌蛋白提取液A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有DNA等的复合物。可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和核酸结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。

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